Expre Levaduras. - Contiene mecanismos de modificación post-traduccional todas células eucariotas (excepto patrones de glicosilación específicos). - Crecimiento rápido (90 min), fácil y barato. Sistema GAL: vía de conversión Galactosa en Glucosa-6-Fosfato,por crecimiento placas suplementadas con Galactosa como medio único de C. - Alta expresión genes estructurales GAL (0,5-1% total de ARNm de céll) - Activador transcripcional Gal4p regulado por Promotor GAL1 en ausencia de Galactosa Gen...
El Replicón: Controla número copias vector recombi dentro hospedero. Origen replicación asociado eleme regulado en cis • Incremento número de copias podría acarrear carga metabó, traer descenso en tasa crecimiento bacte, inestabilidad plasmídica y como consecuencia una baja en sínte prote. • Entonces? NO NECESARIAMENTE, AL ↑ ORI, ↑ RENDIMIENTO EN SÍNTESIS PROTEICA. El Promotor: Regula inicio de transcripción. - Sistemas inducibles: A)Promotor Lac B) Promo Tac C) Promo λpL D)Sist...
Muta dirigida:crear muta puntuales cadena ADN. Inserciones sitios corte restricción dentro genes a clonar (autocorte) –PCR-based mutagénesis-generación d nuevo producto PCR. //Mut dirig: para generar aprox funcionales para gen específico, se debe conocer secuencia ADN a mutar (Gent Reversa), para dirigir mutación en sitio espcf del genoma y conseguir cambio de función de proteína (knock-out para producir proteína defectuosa, alelos nulos)- búsqueda función génica.//Muta naturales:...